DNA損傷檢測技術,你知道多少?

發布者:艾美捷科技發布時間:2020-01-07

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        DNA是攜帶生物體遺傳信息的重要分子,它的完整性對細胞存活至關重要。然而,在生命活動中,DNA時刻遭受著內源性(氧化自由基、復制叉崩塌等)或外源性(電離輻射、烷化劑等)刺激,DNA損傷不可避免。



       檢測DNA損傷的方法有很多,根據其原理大致可以分為3類: 基于損傷DNA理化性質的改變檢測DNA損傷、基于分子雜交檢測DNA損傷以及基于DNA損傷后形成的產物檢測DNA損傷。前兩種方法是基于熒光標記直接觀測DNA的損傷情況,而基于DNA損傷后形成的產物檢測DNA損傷是通過標記物的檢測間接反映DNA的損傷程度。

 

檢測原理 檢測技術 所檢測DNA損傷類型
基于損傷DNA理化性質的改變檢測 彗星實驗 鏈斷裂及堿不穩定位點
基于分子雜交檢測 熒光原位雜交法 鏈斷裂
基于DNA損傷后形
成產物檢測
yH2AX 鏈斷裂
8-OHdG DNA化學修飾
TUNEL 細胞凋亡所致DNA鏈斷裂

 

       ※ 基于DNA損傷后形成產物進行檢測

 

       DNA損傷過程中可形成某些特定的損傷產物,可通過檢測損傷產物(磷酸化H2AX、8-OHdG等)來評估DNA損傷。也可標記損傷DNA,如末端脫氧核苷酸轉移酶介導的脫氧尿苷三磷酸標記(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL),通過標記物的檢測間接反映DNA的損傷程度。


       1.雙鏈斷裂標志物磷酸化H2AX檢測法

       H2AX是組蛋白H2A家族成員之一,包含一個進化保守區域SQ位于真核細胞的C末端,分子量為14KD,139位有個絲氨酸殘基,在細胞發生DNA雙鏈斷裂后的數分鐘內,將會被ATM,ATR和PRKDC磷酸化,形成γH2AX,進而迅速招募DNA修復蛋白和凋亡蛋白到損傷部位,每個雙鏈的斷裂區會有成百上千的γ-H2AX,然后在1h左右數量和密度達到峰值。由于γH2AX的出現與DNA雙鏈斷裂緊密關聯,是目前國內外研究細胞DNA雙鏈斷裂應激反應的熱點之一,同時也可以作為DNA雙鏈斷裂的標志物。

 

(1)雙鏈斷裂標志物磷酸化H2AX檢測法

 

       由于與DNA雙鏈斷裂緊密相關,γH2AX可以作為雙鏈修復的標志物,艾美捷可為您提供完備的H2AX檢測產品:

 

        γH2AX檢測試劑盒:

 

貨號 名稱 描述 規格
P-6001-096 EpiQuik In Situ DNA Damage Assay Kit
原位DNA損傷檢測試劑盒
通過原位檢測磷酸化H2AX Ser139評估DNA損傷 96 assays

 

        H2AX&γH2AX相關抗體:

 

類型 貨號 名稱 應用
H2AX抗體 MAB20144 H2AFX monoclonal antibody, clone BIA-8 WB-Ce、IHC-P、ICC、IF、IP
MAB12802 Histone H2AX monoclonal antibody, clone RM214 WB-Ce、ICC、ELISA
PAB8764 H2AFX polyclonal antibody WB-Ce、IHC、IP
γH2AX抗體 MAB15279 Histone H2AX (phospho S139) monoclonal antibody, clone 2A9-B5 WB-Ce、IF
MAB15111 Histone H2AX (phospho S139) monoclonal antibody, clone RM224 WB-Ce、ICC、IF
MAB21809 H2AFX (phospho S139) monoclonal antibody WB、 IHC-P、 IF、 IP

 

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       2.氧化損傷標志物8-OHdG檢測法

       DNA氧化損傷產物中,作為DNA中脫氧鳥苷(dG)的羥基加合物,8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)因其形成量大,影響因素少,已被公認為最能反映體內DNA氧化損傷程度的生物標志物。

 

氧化損傷標志物8-OHdG檢測法

        OHdG檢測試劑盒:

 

貨號 名稱 規格
P-6003-48 EpiQuik 8-OHdG DNA Damage Quantification Direct Kit (Colorimetric)
8-OHdG DNA損傷定量檢測試劑盒(比色法)
48 assays
P-6003-96 96 assays

 

8-OHdG相關抗體:

貨號 名稱 應用
MAB6116 8-OHdG monoclonal antibody, clone N45.1 IHC

 

       3.DNA斷片標記法

       原位末端標記法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)是一種檢測凋亡細胞DNA鏈斷裂片段的方法。細胞凋亡發生時,內源性核酸內切酶將DNA降解成片段,在脫氧核苷酸末端轉移酶的作用下,底物dUTP 或BrDU(無或有熒光標記)可連接到DNA斷片的3-OH末端,采用熒光顯微鏡或流式細胞儀對標記物進行分析,實現在單細胞水平檢測凋亡細胞的DNA碎片。

 

DNA斷片標記法

 

貨號 名稱 樣本類型
KA0773 In Situ BrdU DNA Fragmentation Assay Kit 細胞、組織
KA0775 In Situ BrdU DNA Fragmentation Assay Kit (IHC) 細胞、組織
KA0776 In Situ BrdU DNA Fragmentation Assay Kit (Red) 細胞、組織

 

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